Československý transplantační kongres
 |
|
1. československý transplantační kongres 2. československý transplantační kongres |
Konferenční abstrakta 2008
Abstrakta přednášek – sekce lékařů
ANALÝZA FENOTYPU A RASTOVÝCH VLASTNOSTÍ MEZENCHYMOVÝCH BUNIEK DERIVOVANÝCH Z KOSTNEJ DRENE
D. Bačenková, J. Rosocha, L. Lehocká, V. Holovská, D. Harvanová
Združená tkanivová banka LF UPJŠ a FNLP Košice
• Združená tkanivová banka LF UPJŠ a FNsP, Trieda SNP 1, 040 66, Košice, SR
Mezenchýmové stromálne bunky (hMSC) sú súčasťou kostnej drene, tukového tkaniva, svalu a placenty. Sú schopné mitoticky sa deliť a majú kapacitu viaclíniovej diferenciácie. Ich koncentrácia v kostnej dreni je približne 1 zo 100 tisíc buniek. Charakterizácia hMSC je definovaná minimálnymi kritériami stanovenými Medzinárodnou spoločnosťou pre bunkovú terapiu. Podmienkou definície hMSC je adherencia na plastový povrch. Minimálne 95% hMSC musí exprimovať molekuly CD105, CD73 a CD90 a nesmú exprimovať CD45, CD34, CD14, alebo CD11b, CD79., alebo CD19 a HLA-DR. hMSC musia byť schopné diferencovať sa in vitro minimálne na osteoblasty, adipocyty a chondrocyty. Ako významne špecifický marker hMSC sa v najnovších prácach uvádza CD271. Marker patrí k nízko afinitným receptorom s väzbou na NGF, BDNF, neurotrophin.
3. CD105 je transmembránový glykopreoteín s väzbou na TGF-beta-1 and TGF-beta-3. FZD9 je prítomný na bunkovom povrchu kultivovaných hMSC získaných z kostnej drene a placenty. Nové štúdie preukazujú že FZD9 je špecifický pre mezenchýmové stromálne bunky. CD146 je marker pericytov. Vzťah pericytov a hMSC nie je doposial presne definovaný, nové štúdie zaznamenali výraznú podobnosť hMSC a pericytov, ktoré majú schopnosť viaclíniovej diferenciácie tak ako hMSC.V našej práci sme analyzovali fenotyp in vitro kultivovaných ľudských hMSC derivovaných z kostnej drene a hodnotili ich rastové vlastnosti.
Z kostnej drene sme izolovali jadrové bunky jednokrokovou metódou, lýzou erytrocytov. Bunky boli následne kultivané in vitro v kultivačných nádobách pre adherentné línie. Suspenziu buniek sme po prvej pasáži imunomagenticky separovali na základe markerov mezenchýmových buniek CD 271+ a CD105+. Fenotyp oboch separovaných populácií buniek sme testovali imunoflorescenčne prietokovou cytometriou na prítomnost špecifických povrchových molekúl CD 271+, CD105+, Oct 3/4+, Rex-1+, PDGFR ß, Nanog+ a CD45-.
Imunomagnetickou separáciou sme získali frakciu CD 271+ a CD105+ buniek. Zaznamenali sme adherenciu buniek oboch izolovaných frakcií. Bunky vretenovitej morfológie vytvárali fibroblastoidné kolónie. hMSC z kostnej drene sa dajú izolovať dvomi základnými metódami, adherenciou na kultivačný povrch a imunomagnetickou izoláciou prostredníctvom antigénov CD271 a CD105.
Antigény CD271, CD105, Oct-4 sú použitelné pre bližšiu fenotypovú charakterizáciu hMSC. Mezenchýmové stromálne bunky majú rastový potenciál a definované vlastnosti, ktoré si zachovávajú pri in vitro kultivácii aj počas početných pasáži.