Československý transplantační kongres
 |
|
1. československý transplantační kongres 2. československý transplantační kongres |
Konferenční abstrakta 2006
Abstrakta přednášek – sekce lékařů
SKÚSENOSTI S MERANÍM HLADINY MRNA CYTOTOXICKÝCH PROTEÍNOV GRANZÝMU B A PERFORÍNU V BUNKÁCH MOČA U PACIENTOV PO TRANSPLANTÁCII OBLIČKY
Žilinská Z., Bandžuchová E.1, Kuba D.1
FN Bratislava, 1SCOT SZU, Bratislava
Úvod:
Akútna rejekcia po transplantácii obličky má negatívny vplyv na dlhodobé prežívanie štepu. Štandardná technika používaná na diagnózu a vyhodnotenie akútnej dysfunkcie štepu je biopsia. Markermi aktivácie buniek pri akútnej rejekcii sú cytotoxické proteíny granzým B a perforín, produkované pri apoptóze mediovanej cytotoxickými T-lymfocytmi. Rozvoj citlivých molekulových metód na detekciu mRNA umožnil monitorovanie expresie mRNA v malom počte buniek uvoľnených do moča.
Ciele:
Cieľom práce je porovnanie metód RT-PCR s vizuálnym vyhodnotením a real-time RT-PCR na stanovenie expresie granzýmu B a perforínu v moči pacientov s akútnou rejekciou, chronickou rejekciou, stabilnou funkciou štepu a u zdravých kontrol.
Metódy:
Izolácia celkovej RNA z močového sedimentu pomocou Trizolu a príprava cDNA použitím MultiScribe reverznej transkriptázy a oligo d(T)16 primeru. 1. PCR amplifikácia, detekcia po elektroforéze v 2% agarózovom géli s etídium bromidom, vizuálne hodnotenie pozitivity. 2. Real-time PCR s použitím značených špecifických oligonukleotidových prób. Normalizovanie výsledkov vzhľadom na endogénnu kontrolu GAPDH a stanovenie relatívnej expresie v porovnaní s kontrolnou skupinou. Skupiny pacientov: Akútna rejekcia, chronická rejekcia, stabilná funkcia, zdravá kontrola.
Záver:
Pri porovnaní metód je metóda real-time PCR rýchlejšia, technicky menej náročná, presnejšia a vyhodnotenie nie je zaťažené individuálnou chybou. Stanovenie hladiny mRNA granzýmu B je špecifickejšie pre predikciu akútnej rejekcie.